@article{ConnorZantowHustetal.2016, author = {Connor, Daniel Oliver and Zantow, Jonas and Hust, Michael and Bier, Frank Fabian and von Nickisch-Rosenegk, Markus}, title = {Identification of Novel Immunogenic Proteins of Neisseria gonorrhoeae by Phage Display}, series = {PLoS one}, volume = {11}, journal = {PLoS one}, publisher = {PLoS}, address = {San Fransisco}, issn = {1932-6203}, doi = {10.1371/journal.pone.0148986}, pages = {24}, year = {2016}, abstract = {Neisseria gonorrhoeae is one of the most prevalent sexually transmitted diseases worldwide with more than 100 million new infections per year. A lack of intense research over the last decades and increasing resistances to the recommended antibiotics call for a better understanding of gonococcal infection, fast diagnostics and therapeutic measures against N. gonorrhoeae. Therefore, the aim of this work was to identify novel immunogenic proteins as a first step to advance those unresolved problems. For the identification of immunogenic proteins, pHORF oligopeptide phage display libraries of the entire N. gonorrhoeae genome were constructed. Several immunogenic oligopeptides were identified using polyclonal rabbit antibodies against N. gonorrhoeae. Corresponding full-length proteins of the identified oligopeptides were expressed and their immunogenic character was verified by ELISA. The immunogenic character of six proteins was identified for the first time. Additional 13 proteins were verified as immunogenic proteins in N. gonorrhoeae.}, language = {en} } @misc{ConnorZantowHustetal.2016, author = {Connor, Daniel Oliver and Zantow, Jonas and Hust, Michael and Bier, Frank Fabian and von Nickisch-Rosenegk, Markus}, title = {Identification of novel immunogenic proteins of Neisseria gonorrhoeae by phage display}, series = {Postprints der Universit{\"a}t Potsdam : Mathematisch-Naturwissenschaftliche Reihe}, journal = {Postprints der Universit{\"a}t Potsdam : Mathematisch-Naturwissenschaftliche Reihe}, number = {541}, issn = {1866-8372}, doi = {10.25932/publishup-41107}, url = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:kobv:517-opus4-411077}, pages = {24}, year = {2016}, abstract = {Neisseria gonorrhoeae is one of the most prevalent sexually transmitted diseases worldwide with more than 100 million new infections per year. A lack of intense research over the last decades and increasing resistances to the recommended antibiotics call for a better understanding of gonococcal infection, fast diagnostics and therapeutic measures against N. gonorrhoeae. Therefore, the aim of this work was to identify novel immunogenic proteins as a first step to advance those unresolved problems. For the identification of immunogenic proteins, pHORF oligopeptide phage display libraries of the entire N. gonorrhoeae genome were constructed. Several immunogenic oligopeptides were identified using polyclonal rabbit antibodies against N. gonorrhoeae. Corresponding full-length proteins of the identified oligopeptides were expressed and their immunogenic character was verified by ELISA. The immunogenic character of six proteins was identified for the first time. Additional 13 proteins were verified as immunogenic proteins in N. gonorrhoeae.}, language = {en} } @phdthesis{Connor2016, author = {Connor, Daniel Oliver}, title = {Identifikation und Charakterisierung neuer immunogener Proteine und anschließende Generierung rekombinanter Antik{\"o}rper mittels Phage Display}, url = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:kobv:517-opus4-104120}, school = {Universit{\"a}t Potsdam}, pages = {VII, 112, lv Seiten}, year = {2016}, abstract = {Seit der Einf{\"u}hrung von Antibiotika in die medizinische Behandlung von bakteriellen Infektionskrankheiten existiert ein Wettlauf zwischen der Evolution von Bakterienresistenzen und der Entwicklung wirksamer Antibiotika. W{\"a}hrend bis in die 80er Jahre verst{\"a}rkt an neuen Antibiotika geforscht wurde, gewinnen multiresistente Keime heute zunehmend die Oberhand. Um einzelne Pathogene erfolgreich nachzuweisen und zu bek{\"a}mpfen, ist ein grundlegendes Wissen {\"u}ber den Erreger unumg{\"a}nglich. Bakterielle Proteine, die bei einer Infektion vorrangig vom Immunsystem prozessiert und pr{\"a}sentiert werden, k{\"o}nnten f{\"u}r die Entwicklung von Impfstoffen oder gezielten Therapeutika n{\"u}tzlich sein. Auch f{\"u}r die Diagnostik w{\"a}ren diese immundominanten Proteine interessant. Allerdings herrscht ein Mangel an Wissen {\"u}ber spezifische Antigene vieler pathogener Bakterien, die eine eindeutige Diagnostik eines einzelnen Erregers erlauben w{\"u}rden. Daher wurden in dieser Arbeit vier verschiedene Humanpathogene mittels Phage Display untersucht: Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Borrelia burgdorferi und Clostridium difficile. Hierf{\"u}r wurden aus der genomischen DNA der vier Erreger Bibliotheken konstruiert und durch wiederholte Selektion und Amplifikation, dem sogenannten Panning, immunogene Proteine isoliert. F{\"u}r alle Erreger bis auf C. difficile wurden immunogene Proteine aus den jeweiligen Bibliotheken isoliert. Die identifizierten Proteine von N. meningitidis und B. burgdorferi waren gr{\"o}ßtenteils bekannt, konnten aber in dieser Arbeit durch Phage Display verifiziert werden. F{\"u}r N. gonorrhoeae wurden 21 potentiell immunogene Oligopeptide isoliert, von denen sechs Proteine als neue zuvor unbeschriebene Proteine mit immunogenem Charakter identifiziert wurden. Von den Phagen-pr{\"a}sentierten Oligopeptide der 21 immunogenen Proteine wurden Epitopmappings mit verschiedenen polyklonalen Antik{\"o}rpern durchgef{\"u}hrt, um immunogene Bereiche n{\"a}her zu identifizieren und zu charakterisieren. Bei zehn Proteinen wurden lineare Epitope eindeutig mit drei polyklonalen Antik{\"o}rpern identifiziert, von f{\"u}nf weiteren Proteinen waren Epitope mit mindestens einem Antik{\"o}rper detektierbar. F{\"u}r eine weitere Charakterisierung der ermittelten Epitope wurden Alaninscans durchgef{\"u}hrt, die eine detaillierte Auskunft {\"u}ber kritische Aminos{\"a}uren f{\"u}r die Bindung des Antik{\"o}rpers an das Epitop geben. Ausgehend von dem neu identifizierten Protein mit immunogenem Charakter NGO1634 wurden 26 weitere Proteine aufgrund ihrer funktionellen {\"A}hnlichkeit ausgew{\"a}hlt und mithilfe bioinformatischer Analysen auf ihre Eignung zur Entwicklung einer diagnostischen Anwendung analysiert. Durch Ausschluss der meisten Proteine aufgrund ihrer Lokalisation, Membrantopologie oder unspezifischen Proteinsequenz wurden scFv-Antik{\"o}rper gegen acht Proteine mittels Phage Display generiert und anschließend als scFv-Fc-Fusionsantik{\"o}rper produziert und charakterisiert. Die hier identifizierten Proteine und linearen Epitope k{\"o}nnten einen Ansatzpunkt f{\"u}r die Entwicklung einer diagnostischen oder therapeutischen Anwendung bieten. Lineare Epitopsequenzen werden h{\"a}ufig f{\"u}r die Impfstoffentwicklung eingesetzt, sodass vor allem die in dieser Arbeit bestimmten Epitope von Membranproteinen interessante Kandidaten f{\"u}r weitere Untersuchungen in diese Richtung sind. Durch weitere Untersuchungen k{\"o}nnten m{\"o}glicherweise unbekannte Virulenzfaktoren entdeckt werden, deren Inhibierung einen entscheidenden Einfluss auf Infektionen haben k{\"o}nnten.}, language = {de} }